蜂蜜中氯霉素的檢測說明

•  氯霉素檢測：

　　目前的氯霉素等抗生素快速檢測，主要有酶聯免疫法（ELISA）和膠體金免疫層析法。
　　膠體金法的特點是快速、簡單，無需實驗室器材和專業的操作人員，前處理簡單，結果直觀，常溫保存。國內有很多的廠家均有生產，比如上?？祆`，北京六角體等。現已廣泛應用于國內各大企業。
　　膠體金法只需將處理好的樣品加入稀釋液，攪拌均勻，將混合好的檢測液滴入檢測卡中，5~10分鐘即可根據卡上的出線情況判讀結果。
　　ELISA法反應原理 
　　主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的基本原理來進行的。在整個反應當中,樣品中氯霉素含量越多，反應呈色就越淡。反之，樣品中氯霉素含量越少，則呈色越深。 
　　試劑盒組成 
　　1、微量測試孔：每條8孔，每板12條 
　　2、氯霉素標準溶液： 
　　0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb，1.5ml/瓶 
　　3、10倍濃縮萃取稀釋液：一瓶，30ml/瓶 
　　4、10倍濃縮洗滌液：一瓶，30 ml /瓶 
　　5、氯霉素酶標記物： 一瓶，8 ml/瓶 
　　6、底物溶液：一瓶，12 ml/瓶 
　　7、反應終止液：一瓶，13 ml/瓶 
　　使用說明 
　　A、注意事項 
　　1、使用前先將氯霉素標準溶液6瓶，濃縮萃取稀釋液，濃縮洗滌液，酶標記物，底物溶液及微量測試孔條置于室溫下，回溫30分鐘。 
　　2、原倍萃取稀釋液及洗滌液配制 
　　用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液分別以1： 9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水)，即可作為樣品萃取稀釋液與微孔板清洗液。 
　　3、回溫后，取出所需微量測試孔條，將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好，置于4o℃保存。 
　　B、樣品制備 
　　1.待測物為生乳，則依以下方法進行處理 (5倍稀釋) 
　　取100ul待測生乳加入400ul萃取稀釋液，振蕩混合后備用。 
　　2.待測物為蜂蜜，則依以下方法進行處理 
　　a.取2g蜂蜜、4ml蒸餾水與2ml 乙酸乙酯置入離心管中，震蕩約5分鐘，使其充分混合均勻。 
　　b.離心10分鐘(3000rpm)，取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50℃下氮氣吹干(溫度請勿超過50oC)。 
　　c.加入0.5ml萃取稀釋液，震蕩約10秒鐘后備用。 
　　3. 待測物為血清、則依以下方法進行處理 
　　a.抽取待檢動物血液，離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用，注意不要有溶血。 
　　b.將3ml血清加入離心管中，再加入6ml乙酸乙酯，震蕩混合約30秒。 
　　c.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮氣吹干。 
　　d.于此玻璃管中加入正己烷2ml，先將殘余物*溶解后，再加入1 ml萃取稀釋液，震蕩約30秒鐘。 
　　e. 離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
　　f.若有乳化現象，請先將大部分上層液(正己烷)取出后，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5~10分鐘，可改善乳化情形。 
　　4. 待測物為雞肉或魚、蝦，則依以下方法進行處理 
　　a.將3克樣品剪碎后放入50 ml離心管中，再加入6ml乙酸乙酯，并以均質機均質約1分鐘，再震蕩約30秒。 
　　b.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮氣吹干。 
　　c.于此玻璃管中加入正己烷2 ml，先將殘余物*溶解后(若未能*溶解，可能會導致回收率降低)，再加入1 ml萃取稀釋液，震蕩約30秒鐘。 
　　d.離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
　　e.若有乳化現象，請先將大部分上層液(正己烷)取出后，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5~10分鐘，可改善乳化情形。待測物為血清、則依以下方法進行處理 
　　5.待測物為內臟(肝、心等)，則依以下方法進行處理(5倍稀釋) 
　　同上述步驟a~d，但下層液吸出后，再以萃取稀釋液稀釋5倍(即下層液50ul加萃取稀釋液200ml)。 
　　6.待測物為飼料，則依以下方法進行處理(10倍稀釋) 
　　同上述步驟a~d，但下層液吸出后，再以萃取稀釋液稀釋10倍(即下層液30ul加萃取稀釋液270ml)。 
　　C、操作步驟 
　　本產品的酶標記物與氯霉素標準溶液均直接使用，無需再稀釋。 
　　1、于適當微孔中分別加入100mL標準溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。 
　　2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前處理的樣品溶液。 
　　3、再于每一微孔中另再加入50mL酶標記物。 
　　4、輕敲盤子四周，使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育1小時。 
　　5、將微孔中的反應液甩掉，再將洗液加滿每一微孔后甩掉，重復洗3次。 
　　6、zui后一次甩掉后，在吸水紙上拍干。 
　　7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后，輕敲盤子四周，使其充分混合。 
　　8、于室溫下避光靜置溫育20分鐘。 
　　9、于每一微孔中加入100mL反應終止液。 
　　10、用酶標儀于波長450nm下判讀。 
　　D、判定 
　　1. 計算B/B0值。用樣品或標準液吸光度值(B)除以零標準吸光度值(B0)再乘以100%。 
　　2. 以B/B0值為縱坐標，以標樣濃度的對數值為橫坐標，做標準半對數曲線。 
　　3. 根據每個樣品的B/B0值就可從曲線上讀出相對應樣品的濃度。 
　　4. 由于樣品經過了預先稀釋，因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。 
　　E、標準曲線 
　　F、靈敏度 
　　氯霉素試劑檢測盒的平均檢測下限為 0.05ppb，此濃度之吸光值與陰性標準溶液(0ppb)之吸光值有明顯的差異。 
　　G、 特異性 
　　針對以下抗生素進行交叉反應之測試，結果如下： 
　　Chloramphenicol =100% 
　　Chloramphenicol(free base) <0.1% 
　　Gentamycin <0.1% 
　　Tetracycline <0.1% 
　　Penicillin G <0.1% 
　　Sulfamethazine <0.1% 
　　H、再現性 
　　針對氯霉素檢測試劑盒精密度測試，重復6次，所得不同濃度標準溶液的吸光值變異系數(%CV).
　　I、回收率 
　　生乳(添加1.0ppb)104~117% 
　　蜂蜜(添加0.3ppb)90~110% 
　　蝦及魚肉(添加0.5ppb)95~110% 
　　雞肉(添加0.5ppb) 90~120% 
　　血清(添加0.5ppb)100~120% 
　　內臟(添加1.0ppb) 100~120% 
　　飼料(添加2.0ppb)80~110% 
　　氯霉素檢測試劑盒 
　　簡介 
　　氯霉素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由于其具有效果好以及價格低廉等優點，目前已被普遍應用于各類家禽、家畜、水產品及蜂制品的各種傳染性疾病的治療。然而氯霉素有其嚴重的副作用,它會抑制人體骨髓的造血功能，從而引起再生障礙性貧血和粒細胞缺乏癥。目前，我國已禁止其使用。 
　　簡化了樣品處理方式，使用簡便，省時省力省錢，整個操作過程不到90分鐘。本產品檢測范圍廣(雞肉、魚、蝦、蟹、牛奶、血清、肌肉、組織、飼料與蜂蜜等)，回收率為80%－120%，靈敏度可達到0.05ppb. 
　　簡單 
　　1． 樣品提取方便快捷。 
　　2． 90分鐘得到結果。 
　　3． 只需基本的實驗室設備。 
　　4． 操作人員只需zui基本的實驗知識。 
　　準確 
　　1． 結果重現性高。 
　　2． 至0.05ppb。 
　　3． 與其它抗體的交叉反應率極低。 
　　產品規格 
　　包裝：每包96孔 
　　靈敏度: 0.05ppb 
　　測試區間：0.05ppb－4.05ppb 
　　檢測時間：80分鐘(提取后) 
　　儲存條件：2-8℃
　　氯霉素快速檢測試紙（48條/盒） 型號:DP1 
　　氯霉素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由于其具有效果好以及價格低廉等優點，目前已被普遍應用于各類家禽、家畜、水產品及蜂制品的各種傳染性疾病的治療。然而氯霉素有其嚴重的副作用,它會抑制人體骨髓的造血功能，從而引起再生障礙性貧血和粒細胞缺乏癥。目前，我國已禁止其使用。 
　　氯霉素檢測試紙，簡化了樣品處理方式，使用簡便，,整個操作過程只須15分鐘。靈敏度可達到3ppb
　　其原理為：在試劑片的 ‘中央判讀區’噴有2條隱形的線,上面一條為對照線(C線)，下面一條為測試線(T線)。若樣品中氯霉素的濃度小于3ppb，則T線呈色與C線相近；若樣品中氯霉素的濃度大于3ppb，則T線將比C線淺很多或*看不到線，也就是說，氯霉素濃度越高T線越淺。 
　　簡單：
　　1． 成套的裝置，提供準確一致的可視的結果
　　2． 適于現場檢測。15分鐘得到結果。
　　3． 操作人員只需zui基本的化驗知識。
　　準確：
　　1． 結果重現性高。
　　2． 至3ppb。
　　3． 與其它抗體的交叉反應率極低 
　　：
　　我們為用戶提供zui方便、快捷、周到的服務。 
　　產品規格
　　包裝：每包16片
　　靈敏度: 3ppb
　　檢測時間：15分鐘(提取后)
　　儲存條件：2-8℃ 
　　組成 
　　本試紙組可進行16次實驗 
　　1、反應孔:2條16孔
　　2、氯霉素指示劑：1瓶 
　　3、檢測試紙片一筒 ：16片 
　　4、小吸管：24支 
　　5、樣品混合棒：20根 
　　6、10倍濃縮稀釋緩沖液：1瓶 
　　試紙使用說明： 
　　A、注意事項 
　　1、 試紙需要干燥保存，請隨時確保瓶蓋蓋嚴 
　　2、 測試環境溫度>20℃即可。 
　　3、盡量不要觸摸試紙片中央在白色膜面。 
　　4、本試紙使用前，需先將整套組成部分在室溫中回溫30分鐘，以確保反應的正確性。 
　　5、檢測一個樣品使用一個反應孔，一片測試片及一支滴管。未用完的氯霉素指示劑，可放回4℃冰箱留待下次再用。未用過的微量測試孔，隔次仍可使用。 
　　6、結塊或發臭的牛奶不適合檢測。 
　　7、原倍稀釋緩沖液配制：用蒸餾水將10倍濃縮稀釋緩沖液以1:9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水)，即可作為樣品稀釋液。 
　　B、樣品制備： 1.待測物為牛奶可直接進行檢測。 
　　2.待測物為蜂蜜，則依以下方法進行處理： 
　　以金屬勺取少量待測蜂蜜樣品置于火上加熱至沸騰，用小細管趁熱吸取樣品（勿吸入氣泡），以稀釋緩沖液做1：3稀釋。 
　　3. 待測物為血清、則依以下方法進行處理： 
　　a.抽取待驗動物血液，離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用，注意不要有溶血。 
　　b將3ml血清加入離心管中，再加入6 ml乙酸乙酯，震蕩混合約30秒。 
　　c.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮氣吹干。 
　　d.于此玻璃管中加入正己烷2ml，先將殘余物*溶解后，再加入1 ml 稀釋緩沖液，震蕩約30秒鐘。 
　　e. 離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
　　f.若有乳化現象，請先將大部分上層液(正己烷)取出后，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5～10分鐘，可改善乳化情形。 
　　4. 待測物為雞肉或魚、蝦，則依以下方法進行處理： 
　　a.將3克樣品剪碎后放入50 ml離心管中，再加入6 ml乙酸乙酯，并以均質機均質約1分鐘，再震蕩約30秒。 
　　b.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮氣吹干。 
　　c.于此玻璃管中加入正己烷2ml，先將殘余物*溶解后(若未能*溶解，可能會導致回收率降低)，再加入1ml稀釋緩沖液，震蕩約30秒鐘。 
　　d.離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
　　e.若有乳化現象，請先將大部分上層液(正己烷)取出后，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5~10分鐘，可改善乳化情形。 
　　5.待測物為內臟(肝、心等)，則依以下方法進行處理(5倍稀釋)： 
　　同上述步驟a～d，但下層液吸出后，再以稀釋緩沖液稀釋5倍(即下層液100μl加 稀釋 緩沖液400ul)。 
　　6.待測物為飼料，則依以下方法進行處理(10倍稀釋)： 
　　同上述步驟a～d，但下層液吸出后，再以稀釋緩沖液稀釋10倍(即下層液100μl加 稀釋 緩沖液900ul)。 
　　C、操作步驟： 
　　(若樣品不只一份，請先為樣品及反應孔做好對應編號) 
　　1.以小吸管在微量測試孔中依次加入兩滴待測的樣品（以小吸管吸取時，須將*滴滴除后，再進行實驗步驟）。 
　　2.充分搖勻氯霉素指示劑，以新的滴管吸取氯霉素指示劑，滴去前兩滴，加入一滴指示劑于待測樣品的測試孔。 
　　3.以手輕輕握住微孔，貼著桌面震蕩使其混合均勻約5分鐘。 
　　4.于每個測試孔中放入試紙片（白色端在下）。 
　　5.靜置10分鐘后判讀結果（判讀結果時間不要超過20分鐘）。 
　　D、判讀： 
　　(由于樣品經過了預先稀釋，因此所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數) 
　　情形1—T線比C線深，或一樣深，表示樣品中氯霉素濃度低于3ppb。 
　　情形2—T線比C線淡，表示樣品中氯霉素濃度高于3ppb。 
　　情形3—若C線*沒出現，則表示測試失敗。